霉菌和酵母菌总数是化妆品卫生质量控制的重要指标之一，不同国家和地区化妆品卫生技术标准中普遍将其列为检验内容。我国目前主要依据《化妆品安全技术规范》（2015年版）中霉菌和酵母菌检验方法（以下简称“ 标准方法”）进行检测，具体方法为采用虎红培养基（pH值6.0±0.2），培养温度为（ 28±2）℃，培养时间为5d，产品前处理稀释剂为生理盐水，制成1:10 、1:100和1:1000的检液。基于标准方法的培养条件，郑萍等、王似锦等研究均表明通过在虎红培养基中添加卵磷脂和吐温80 等中和剂，能够部分消除化妆品中防腐剂的抑菌作用，可提高化妆品中霉菌和酵母菌的检出率。

笔者课题组前期针对化妆品中常见污染的霉菌和酵母菌培养特性开展了系统研究，通过优化培养条件和添加中和剂等方式，建立了一套改良的化妆品中霉菌和酵母菌3d检验方法（以下简称“MSDA方法”）。MSDA方法的培养基为改良SDA（pH值7.0±0.2），培养温度为（28±2）℃，培养时间为3d，产品前处理稀释剂为改良卵磷脂肉汤（ MLBTL，添加1％卵磷脂和1.5％吐温80作为中和剂），制成1:10和1:100检液。该方法缩短了霉菌和酵母菌的检测时间，提高了检测效率。

目前国内外尚无关于化妆品中微生物检验方法验证指导原则。为探讨MSDA方法用于化妆品霉菌和酵母菌检验的可行性，本研究参照《中国药典》药品微生物检验替代方法验证指导原则，以化妆品中常见污染的青霉、曲霉、枝孢霉、根霉、红酵母、念珠菌等真菌代表性菌株作为试验菌，验证MSDA方法在准确度、精密度、定量限、线性、范围、重现性、耐用性等7个参数与标准方法是否存在显著性差异。选取30种含不同防腐剂体系的化妆品产品，依据《中国药典》计数方法适用性试验要求，对MSDA方法的适用性进行评价，旨在为该MSDA方法在化妆品行业的推广应用提供科学依据。

经过对化妆品中霉菌和酵母菌检验MSDA方法的验证研究表明，化妆品中霉菌和酵母菌检验MSDA方法在准确度、精密度、定量限、线性、范围、重现性等验证参数上与《化妆品安全技术规范》（2015版）标准方法检测结果具有等效性，该方法耐用性良好，适用于所有供试化妆品的霉菌和酵母菌检测。通过验证研究及方法适用性试验证明了3d检验MSDA方法切实可行，该方法缩短了检测时间，提高了检测效率，具有进一步推广应用前景。

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